避坑指南：Ethidium Iodide 碘化乙啶(HI)的常见误区与纠正

【使用方法】

（一）溶液配制

储存液：

将碘化乙啶粉末溶于DMSO（常用浓度5-10 mg/mL），分装后-20℃避光保存。

若需水溶性储存液，可溶于含EDTA的缓冲液（如0.1×PBS），但稳定性较低。

工作液：

根据实验需求稀释储存液，常用浓度为0.1-1 μg/mL（如流式细胞术）或0.5 μg/mL（凝胶电泳染色）。

（二）实验应用示例

（1）细菌染色（如金黄色葡萄球菌吞噬实验）

步骤：

将细菌悬液（如5×10⁸ CFU/mL）与碘化乙啶储存液（终浓度5 μg/mL）混合，室温避光孵育15分钟。

冰上离心（4℃, 3000 rpm, 10分钟）去除非结合染料。

用BMM培养基重悬，立即用于流式细胞术检测（FL2通道收集信号）。

原理：HI选择性染色革兰氏阳性菌，而革兰氏阴性菌因外膜屏障不被染色。

（2）细胞核染色（需结合其他探针）

步骤：

固定细胞（如4%多聚甲醛处理），透化后与HI染色液（含RNA酶，去除RNA干扰）孵育30分钟。

与活细胞探针（如Calcein-AM）联用，区分活细胞（仅活细胞探针荧光）与死细胞（HI荧光）。

注意：HI无法穿透完整细胞膜，仅染色膜破损细胞，需固定或使用透化剂。

（3）凝胶电泳染色（替代溴化乙锭）

步骤：

电泳结束后，将凝胶浸泡于0.5 μg/mL HI溶液中30分钟。

用蒸馏水冲洗背景荧光，紫外灯下观察DNA条带。

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优势：与EB类似，但毒性较低（需验证实验兼容性）。

【技术参数】

英文名称：Ethidium Iodide

中文名称：碘化乙啶(HI)

CAS NO：211566-66-4

分子式：C25H28IN3

分子量：497.41

状态：固体

Ex/Em：~518/600nm（与DNA结合）

纯度：≥95%

储存条件：-20℃避光干燥

【避坑指南】

（一）储存与溶解

避免反复冻融：分装储存液，开封后1个月内使用完毕。

DMSO替代风险：若改用其他溶剂（如乙醇），需验证溶解性及荧光稳定性。

（二）浓度控制

过量染色：高浓度可能导致背景荧光过高，建议梯度测试（如5、10、20 μg/mL）。

（三）交叉污染

与其他染料联用：若与SYTO染料（如SYTO 9）联用，需注意激发/发射波长避免重叠。

（四）替代品选择

低毒方案：推荐GelRed、GelGreen或SYTO系列（如SYTO 60），避免遗传毒性风险。

【常见误区与纠正】

（一）误用为核染色剂

纠正：HI染色细胞质和细胞核，但会污染其他亚细胞结构，建议使用DAPI或Hoechst 33342。

（二）与溴化乙锭（EB）混淆

区别：HI毒性略低于EB，但两者均为遗传毒性物质，需同等防护。

（三）革兰氏染色准确性

局限性：HI对革兰氏阴性菌染色效果差，需结合其他探针（如SYTO 9）提高分辨率。

【相关的试剂】

AF 514 NHS酯

DNP马来酰亚胺

DNP-PEG4 NHS酯

ReadiLink xtra iFluor 555

ReadiLink xtra iFluor Cy3

Tide Quencher 5WS马来酰亚胺

Tide Quencher 5.1WS acid [TQ5.1WS acid

Tide Quencher 5.1WS azide [TQ5.1WS azide

SE[6-(2,4-二硝基苯胺基)己酸-N-琥珀酰亚氨基酯

Alpha Fluor 532 酸 [等同于 Alexa Fluor 532 acid

AF680 NHS [等同于 Alexa Fluor 6804 NHS Ester

ReadiLink xtra iFluor AF750 抗体快速标记试剂盒

AF488 羟胺 [等同于 Alexa Fluor 488 Hydroxylamine

AF488 NHS 超级纯 [等同于 Alexa Fluor 488 NHS Ester

Alpha Fluor 594 胺 [等同于 Alexa Fluor 594 C5 amine

注意：本试剂用于科研领域，其他用途概不适用！

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